Evaluación filogenética del BVDV circulante en ganado bovino

La diarrea viral bovina (BVD) es una enfermedad endémica que ocasiona importantes pérdidas económicas a la industria ganadera en muchos países del mundo. El agente causal es un Pestivirus conocido como virus de la diarrea viral bovina (BVDV), el cual presenta dos genotipos (BVDV-1 y BVDV-2) que, según estudios filogenéticos, han sido divididos a su vez en varios subgenotipos.

Evaluar la diversidad genética de un patógeno circulante en una población tiene gran utilidad para el desarrollo de programas de control, sobre todo en lo referente al establecimiento de estrategias vacunales.

En España, existen estudios previos sobre la variabilidad genética del BVDV entre los años 2000 y 2015, determinándose la presencia de ambos genotipos, siendo BVDV-1 el más frecuente, mientras que el BVDV-2 solo se ha detectado de forma puntual. Sin embargo, cabe destacar que la mayoría de estos datos provienen de animales procedentes principalmente de la zona norte de España.

Con el fin de incrementar y actualizar esta información, se procedió a evaluar el genotipo de BVDV presente en los 119 casos clínicos positivos a Pestivirus identificados, durante los años 2015-2019.

Se evaluaron un total de 110 muestras procedentes de 25 provincias españolas y, adicionalmente, 9 muestras de Portugal.
La determinación del genotipo BVDV-1 y BVDV-2 se realizó mediante dos kits comerciales de PCR en tiempo real.

Adicionalmente, en 41 casos seleccionados se determinó el subgenotipo de BVDV mediante la secuenciación y el análisis de la región 5´UTR, usando una metodología previamente descrita por Letellier et al.

Las muestras positivas a Pestivirus fueron obtenidas de animales con diferentes edades y patologías (Tabla 1). Sin embargo, la patología más frecuente fue la de tipo respiratorio (59/119), seguido de la digestiva (33/119).

Por otro lado, se observó que el número de casos positivos fue mayor en el grupo de animales con más de 45 días (69%) que en aquellos menores de 45 días (31%).

Tabla 1. Tipos de patología detectados en los animales de los que proceden las muestras evaluadas.

Según los resultados de los ensayos de PCR en tiempo real (qPCR), el 95% (105/110) de los casos españoles fueron positivos a BVDV-1,
mientras que solo dos fueron positivos a BVDV-2; adicionalmente,
4 casos resultaron negativos a ambos ensayos de qPCR.
Un resultado similar fue obtenido para las muestras de Portugal, donde ocho de los nueve casos fueron positivos a BVDV-1 y solo uno fue positivo a BVDV-2.

Estos casos seleccionados incluyeron 37 positivos a BVDV-1, 2 positivos a BVDV-2 y un caso negativo a los dos ensayos usados para genotipar. Adicionalmente, se secuenció un caso de Portugal positivo a BVDV-2.

BVDV-1

El análisis filogenético de las secuencias de los 37 casos españoles identificados mediante qPCR como BVDV-1, confirmó su pertenencia a dicho genotipo y permitió además su clasificación en los subgenotipos:

• 1a (n=2)
• 1b (n=30)
• 1e (n=4)
• 1f (n=1)

Nuestros resultados corroboran al subgenotipo 1b como el más frecuente y el más extendido por España (Figura 1), tal y como se había descrito previamente.
Se debe mencionar que el subgenotipo 1b ha sido descrito como el más extendido por Europa y está presente en muchos países, entre los que se encuentran Portugal e Italia.
Por otro lado, cabe resaltar que los subgenotipos 1c, 1d, 1h, 1k, 1l y 1p descritos previamente en nuestro país, no pudieron ser identificados en este estudio, debido probablemente a la baja frecuencia con la que se han reportado estos subgenotipos en España.

BVDV-2

En lo referente a los dos casos españoles de BVDV-2 secuenciados, también fueron confirmados para este genotipo e identificados como subgenotipos:

• 2b (n=1)
• 2c (n=1)

Estudios previos han descrito de forma puntual la presencia del subgenotipo 2a en ganado bovino en Galicia y Asturias; y del 2b y 2d en ganado ovino en Castilla y León y Galicia, respectivamente. En nuestro estudio, se identificó la presencia de BVDV-2, concretamente los subgenotipos 2b y 2c, en bovinos procedentes de la provincia de Lérida (Figura 1).

La identificación puntual del BVDV-2 en España, a diferencia de la infección diseminada que se observa para el BVDV-1, nos lleva a sugerir que esta podría ser fortuita, probablemente asociada a la importación de animales de regiones con este genotipo. Sin embargo, no se debe descartar el riesgo que supone para el establecimiento de la infección por BVDV-2 en nuestro país.
En el caso de la muestra positiva a BVDV-2 de Portugal, ésta fue identificada como 2b, un subgenotipo previamente descrito en ese país, y que además demostró un alto grado de homología a la cepa 2b encontrada en España.

Figura 1. Distribución geográfica de los subgenotipos de BVDV-1, BVDV-2 y BDV identificados.

La infección por BDV en bovino no es común, pero se ha descrito de forma puntual en varios países. Además, este genotipo BDV-4 ha sido previamente reportado afectando a rebecos pirenaicos en Huesca, provincia de la cual procede la muestra identificada en el presente estudio. Todo ello parece indicar un flujo de este virus entre animales silvestres y domésticos o viceversa. Lamentablemente, por diversas causas, las otras tres muestras negativas a los ensayos de qPCR no pudieron ser secuenciadas, por lo que la posible presencia de este agente en esas muestras no puede ser del todo descartada.
Por último, el análisis filogenético de las secuencias obtenidas demostró que el subgenotipo 1f presentaba mayor divergencia evolutiva, mientras que los subgenotipos 1a y 1e circulantes en España eran menos divergentes entre ellos que con respecto al subgenotipo 1b (Figura 2).

Los datos también indican que es muy probable que en el noroeste del país se haya dado un proceso de evolución local del subgenotipo 1b. Con respecto a los virus del genotipo BVDV-2, las cepas de subgenotipo 2b identificadas en España y Portugal mostraron un alto porcentaje de similitud nucleotídica y se englobaron dentro del mismo clado (Figura 3).

CONCLUSIONES

En conclusión, según los datos de nuestro estudio, el subgenotipo 1b sigue siendo el más frecuente entre las cepas circulantes de BVDV en España, aunque también se detectaron los subgenotipos 1a, 1e y 1f; todos ellos previamente descritos con baja frecuencia en nuestro país.
Por otro lado, nuestros resultados confirman la presencia de BVDV-2 en España y describen, por primera vez, la identificación de la infección por los subgenotipos 2b y 2c en la ganadería bovina nacional.
Adicionalmente, la identificación en nuestro estudio de un bovino infectado por BDV-4 corrobora que este agente es capaz de ocasionar infección en esta especie animal y que debería ser considerado en el diagnóstico de las infecciones por Pestivirus en el ganado bovino.
En cuanto a Portugal, aunque las muestras evaluadas son escasas, nuestro estudio demuestra que ambos genotipos de BVDV estarían afectando a la población bovina de este país.