Fundamentos y utilidad de la serología en el diagnóstico de enfermedades infecciosas en rumiantes

FUNDAMENTO DE LAS TÉCNICAS SEROLÓGICAS

Las técnicas serológicas son técnicas inmunológicas basadas en la unión irreversible entre una sustancia antigénica (Ag) como virus, bacteria o parásito y su correspondiente anticuerpo (Ac) (Figura 1).

La formación de los complejos Ag-Ac se evalúa mediante marcadores (enzimáticos, fluorescentes, quimioluminiscentes, etc.) o por observación de la aglutinación que se produce tras la unión Ag-Ac.

TÉCNICAS SEROLÓGICAS

Las principales técnicas inmunológicas utilizadas en el diagnóstico serológico de procesos infecciosos en rumiantes son las siguientes:

Inmunoensayo en fase sólida (ELISA)

En este tipo de técnica el Ag se encuentra unido a una fase sólida (placas de 96 pocillos) y la unión Ag-Ac se evidencia enzimáticamente (Figura 2).

La actividad de la enzima sobre el sustrato apropiado se mide mediante cromatografía, siendo la técnica ELISA una de las más utilizadas y de las que hay más kits comerciales disponibles.

Inmunofluorescencia

Los marcadores son sustancias fluorescentes capaces de emitir luz.

Se comercializan láminas con antígenos de los agentes a analizar. Al añadir el suero, los Ac presentes se unen al Ag en la lámina y, posteriormente, se añade Ac antiinmunoglobulina de rumiantes marcado con fluorescencia (conjugado).

El conjugado fluorescente se une a

los Ac que previamente se habían unido a los Ag de la lámina, pudiendo visualizar esta unión mediante un microscopio de fluorescencia (Figura 3). En el diagnóstico rutinario de animales de producción, son técnicas menos utilizadas debido a que son muy laboriosas, dificultando la automatización. Aglutinación La unión Ag-Ac produce una aglutinación que es visible macroscópica o microscópicamente.   Macroaglutinación   El ejemplo más conocido es la técnica de Rosa de Bengala para la detección de anticuerpos frente Brucella sp. (Figura 4). Esta técnica es rápida y económica, por lo que se usa como técnica de screening. Sin embargo, es necesario confirmar los resultados positivos debido a la reacción cruzada con otras bacterias (Yersinia enterocolitica o algunos serovares de Escherichia coli). Así mismo, puede dar falsos negativos para especies en fase rugosa como Brucella ovis.   Microaglutinación   La técnica MAT (por sus siglas en inglés de “Microscopic Agglutination Test”) requiere la utilización de un microscopio para evaluar la aglutinación producida por la unión Ag-Ac. La serología de Leptospira sp. se realiza mediante MAT y es específica de cada serovariedad (Figura 5). Inmunodifusión Se utiliza como soporte de la prueba un gel de agarosa o gel noble donde se realiza un orificio...

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