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06 Mar 2023

Antígenos en cobayas expuestas a bacterias no tuberculosas y tuberculosas

Diferencias en las reacciones de las pruebas cutáneas a antígenos en cobayas expuestas a bacterias no tuberculosas y tuberculosas


  • Las pruebas de intradermotuberculinización simple y comparativa (SITT y CITT) son pruebas oficiales in vivo para el diagnóstico de la tuberculosis bovina (TB) que utilizan derivados proteicos purificados bovinos y aviares (PPD-B y PPD-A).

La infección por bacterias distintas del complejo Mycobacterium tuberculosis (MTC) puede provocar reacciones inespecíficas a estas pruebas. Se evaluó el rendimiento de la prueba cutánea con PPD y nuevos antígenos definidos en el modelo cobaya.

Se utilizó una dosis estándar (SD) de Rhodococcus equi, Nocardia sp., M. nonchromogenicum, M. monacense, M. intracellulare, M. avium subsp. paratuberculosis, M. avium subsp. avium, M. avium subsp. hominissuis, M. scrofulaceum, M. persicum, M. microti, M. caprae y M. bovis, y una dosis más alta (HD) de M. nonchromogenicum, M. monacense, M. intracellulare, M. avium subsp. paratuberculosis se analizaron utilizando PPD-B, PPD-A, P22, ESAT-6-CFP-10-Rv3615c cóctel de péptidos largo (PCL) y proteína de fusión (FP).

La SD de R. equi, Nocardia sp., M. nonchromogenicum, M. monacense, M. intracellulare y M. avium subsp. paratuberculosis no provocó ninguna reacción. La HD de M. nonchromogenicum, M. monacense, M. intracellulare y M. avium subsp. paratuberculosis y la SD de M. avium subsp. hominissuis, M. scrofulaceum y M. persicum, provocaron reacciones inespecíficas (SIT).

Una interpretación de la CITT habría considerado negativos los grupos de M. avium complex y M. scrofulaceum, pero no todos los individuos de los grupos de M. nonchromogenicum HD, M. monacense HD y M. persicum SD. Sólo los animales expuestos a M. bovis y M. caprae reaccionaron a PCL y FP. Estos resultados apoyan la ventaja de complementar o sustituir la PPD-B para mejorar la especificidad sin perder sensibilidad.

Introducción
La tuberculosis animal (TB) es una enfermedad zoonótica de propagación mundial causada por especies englobadas en el complejo M. tuberculosis (MTC), sobre todo por M. bovis y M. caprae. El MTC incluye otras variantes adaptadas a los animales, a saber, M. microti, M. pinnipedii, M. orygis, M. mungi, M. suricattae, el bacilo de Dassie y el bacilo de los chimpancés1.

Se trata de una enfermedad de declaración obligatoria incluida en el Código Sanitario para los Animales Terrestres (TAHC) de la Organización Mundial de Sanidad Animal (WOAH).

La enfermedad tiene un gran impacto económico en la industria ganadera y es un reconocido problema de salud pública debido a su naturaleza zoonótica. Una de las razones de su impacto económico radica en los enormes costes derivados de la implantación y aplicación de estrategias de control de la enfermedad.

Aparte de la inspección post-mortem de los animales en los mataderos en busca de lesiones compatibles con TB, la prueba cutánea de la tuberculina (TST) es el método diagnóstico estándar para la detección in vivo de individuos infectados en los programas de erradicación de la TB2. La Comisión de las Comunidades Europeas reconoce la prueba intradérmica única de la tuberculina (SITT) y la prueba intradérmica comparativa de la tuberculina (CITT) como los ensayos oficiales en los Estados miembros, y el ensayo del interferón-gamma (IFN-γ) como una prueba alternativa que debe realizarse en el laboratorio.

En la SITT, la tuberculina conocida como derivado proteico purificado (PPD) de M. bovis (PPD-B) se inyecta intradérmicamente y se mide el grosor del pliegue cutáneo. Cuando un animal está infectado o ha estado expuesto a la bacteria MTC, se produce una reacción de hipersensibilidad retardada que provoca un aumento del grosor del pliegue cutáneo y/o signos clínicos (edema difuso o extenso, exudación, necrosis, dolor o inflamación de los conductos linfáticos de esa región o de los ganglios linfáticos) en el lugar de la inyección de PPD-B.

En el CITT se inyectan tanto PPD-B como una PPD obtenida de M. avium (PPD-A) para comparar las reacciones.

La sensibilización con algunas micobacterias no tuberculosas (MNT) o la vacunación frente a TB o paratuberculosis, entre otros factores, han sido señalados como factores que pueden afectar a la especificidad de la CITT, llevando al sacrificio de animales no infectados por MTC y causando pérdidas económicas y gran preocupación entre ganaderos y autoridades.

La CITT puede resolver algunos de estos problemas convirtiendo en negativas algunas reacciones inespecíficas a la PPD-B. Su especificidad puede alcanzar valores de hasta el 99,98% , pero puede pasar por alto a algunos individuos infectados por MTC, lo que reduce su sensibilidad. Se han desarrollado reactivos antigénicos distintos de las PPD estándar.

Algunos tienen la capacidad de diferenciar los animales infectados de los vacunados con Bacille Calmette-Guérin (BCG) (DIVA) porque se basan en regiones que están ausentes o no son inmunogénicas en las cepas de la vacuna BCG (ESAT-6, CFP-10 y Rv3615c), como los antígenos definidos cóctel de péptidos largo (PCL) y proteína de triple fusión (FP) utilizados en estudios previos.

Se ha desarrollado un complejo proteico purificado por afinidad a partir de la PPD-B denominado P22 como antígeno alternativo en el diagnóstico basado en anticuerpos de la tuberculosis. Este antígeno también se ha utilizado recientemente en pruebas basadas en la respuesta celular. Se han aislado algunas MNT de animales que reaccionaron a las PPD11.

Así pues, el objetivo del estudio fue evaluar la reactividad cruzada de diferentes MNT y otras bacterias aisladas previamente de ganado no infectado con MTC que reaccionan a la prueba cutánea o que muestran lesiones compatibles con la tuberculosis con antígenos oficiales y nuevos definidos de la prueba cutánea en cobayas expuestas a estos microorganismos.

Resultados- Prueba cutánea
No se excluyó del estudio ningún animal, unidad experimental o punto de datos. Las cobayas del grupo de control (sin sensibilización) no mostraron ninguna reacción a ninguno de los antígenos de prueba cutánea utilizados. 

No se detectó ninguna reacción en el lugar donde se inoculó la solución salina en ninguno de los grupos. No se observaron grandes desviaciones de la media en cada grupo. 

La mayoría de los animales inoculados desarrollaron reacciones cutáneas a PPD-B y P22, excepto los agentes no micobacterianos y los grupos de micobacterias de dosis estándar (SD) que se repitieron (M. nonchromogenicum, M. monacense, M. intracellulare y M. avium subsp. paratuberculosis) utilizando una dosis de sensibilización más alta (HD).

Estas inoculaciones HD se realizaron porque, en contraste con los informes y hallazgos anteriores (es decir, el aislamiento de estos NTM de bovinos reactores no infectados con MTC), no se observaron reacciones con la SD y se consideró necesario probar una HD.

Todos los grupos sensibilizados con MTC, salvo el grupo de M. microti, desarrollaron fuertes reacciones a los antígenos PCL y FP, especialmente a FP, mientras que no se detectó ninguna reacción en los restantes grupos de cobayas. La respuesta específica de los animales sensibilizados con M. microti a PPD-B y P22 fue mucho menor que la mostrada por los otros dos organismos MTC.

La reactividad media más elevada de las sensibilizaciones no MTC (grupo M. persicum) fue inferior a la reactividad media específica de M. bovis o M. caprae frente a la PPD-B. Sin embargo, el área de eritema de una cobaya del grupo sensibilizado con M. persicum cayó dentro del rango del grupo sensibilizado con M. caprae.

Intentar establecer un punto de corte con P22 para diferenciar entre individuos positivos y negativos fue más difícil porque hubo dos sensibilizaciones (M. persicum y M. avium subsp. paratuberculosis HD) que provocaron reacciones incluso superiores a la específica esperada con M. caprae.

Los grupos sensibilizados con MTC (excepto el grupo de M. microti) desarrollaron fuertes reacciones a los antígenos PCL y FP, especialmente a FP, mientras que no se detectaron reacciones en los grupos expuestos a bacterias distintas de MTC. La respuesta específica (PPD-B y P22) de los animales sensibilizados con M. microti fue muy inferior a la mostrada por los otros dos miembros de MTC.

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